近期，國際學(xué)術(shù)期刊Vaccine在線發(fā)表了中科院上海巴斯德研究所分子病毒課題組的研究論文“A Vero-cell-adapted vaccine donor strain of influenza A virus generated by serial passages”（通過連續(xù)傳代獲得甲型流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)性疫苗株）。

　　流感病毒一直危害人類健康，其中甲型流感病毒因變異快、宿主范圍廣、亞型和毒株眾多等原因極易引發(fā)感染。目前，預(yù)防流感最有效的方法是接種流感疫苗。20世紀(jì)40年代起，通過接種雞胚擴(kuò)增得到流感疫苗毒株一直是生產(chǎn)流感疫苗的通用方法，然而不斷增長的疫苗和疫情防控需求使雞胚生產(chǎn)平臺中雞胚供應(yīng)不足、卵清蛋白過敏以及產(chǎn)量有限等諸多缺陷越來越明顯。因此, 研發(fā)易于擴(kuò)大化培養(yǎng)、無過敏反應(yīng)、并能夠更好地保持抗原性的哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)成為生產(chǎn)流感疫苗的新一代熱門介質(zhì)。非洲綠猿猴腎細(xì)胞系（Vero）、犬腎細(xì)胞系（MDCK）以及胚胎視網(wǎng)膜細(xì)胞系（PER.C6）都被選為人用流感疫苗的生產(chǎn)介質(zhì)，其中Vero細(xì)胞系已成功用于人用狂犬、脊灰等疫苗的生產(chǎn)，安全性得到充分認(rèn)證。然而，目前通用的流感病毒疫苗骨架株P(guān)R8病毒在Vero細(xì)胞上的生長非常有限，導(dǎo)致Vero細(xì)胞流感疫苗產(chǎn)量受限，如何提高PR8疫苗株在Vero細(xì)胞上的產(chǎn)量和效率是將Vero細(xì)胞開發(fā)成流感疫苗二倍體細(xì)胞生產(chǎn)介質(zhì)的關(guān)鍵技術(shù)。

　　上海巴斯德研究所副研究員徐柯及博士研究生胡偉斌、張宏等在孫兵研究員的指導(dǎo)下，將PR8病毒在Vero細(xì)胞上連續(xù)進(jìn)行20次傳代獲得了Vero細(xì)胞的適應(yīng)株P(guān)R8-p20。通過病毒全基因組測序以及反向遺傳學(xué)構(gòu)建重組病毒，最終鑒定到病毒內(nèi)部基因NP、PB1、PA和NS1上的四個(gè)氨基酸位點(diǎn)突變決定了PR8病毒在Vero細(xì)胞上的適應(yīng)性，并將含有這四個(gè)突變位點(diǎn)的PR8病毒命名為PR8-4mut。病毒生長曲線結(jié)果表明，PR8-4mut病毒比現(xiàn)有的PR8疫苗株生長更快，可在病毒接種后48小時(shí)即達(dá)到最高病毒滴度， 相對PR8病毒滴度提高1000倍。因此，以PR8-4mut作為疫苗骨架株構(gòu)建的禽流感（H5N1、H7N1和H9N2）和人流感（H1N1和H3N2）疫苗株在Vero細(xì)胞上的產(chǎn)量都可大幅提高，而且研究得到的Vero細(xì)胞適應(yīng)株P(guān)R8-4mut在小鼠和雞胚上的致病力與PR8相當(dāng)，并保持胰酶依賴性。研究結(jié)果表明，PR8-4mut是能夠包裝各種亞型流感病毒HA和NA，保持分離株原始抗原性的甲型流感疫苗Vero細(xì)胞骨架株。

　　該項(xiàng)研究獲得了國家自然科學(xué)基金、國家863項(xiàng)目以及賽諾菲安萬特——上海生命科學(xué)研究院青年人才等項(xiàng)目的支持。

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