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淺談膠乳顆粒增強(qiáng)比濁法在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的作用

來源:醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)布時(shí)間:2015-01-06 10:46:04

目前,體液標(biāo)志蛋白的檢測(cè)方法主要采用免疫學(xué)方法,以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay,ELISA)、放射免疫測(cè)定(Radioimmunoassay,RIA)和膠體金層析法(俗稱“金標(biāo)”)這幾種方法為主。ELISA方法雖然在臨床上使用了近二十年,但它依然存在一些致命缺點(diǎn),定量準(zhǔn)確性差、操作時(shí)間長(zhǎng)、自動(dòng)化程度低,一般只能用于定性檢測(cè)。RIA靈敏度高,但不穩(wěn)定,重復(fù)性比ELISA差,而且存在放射性污染的危險(xiǎn)。金標(biāo)方法雖然穩(wěn)定性較好,但靈敏度較低,只能定性,不能定量。特別是重復(fù)性差這一缺點(diǎn)限制了這些檢測(cè)技術(shù)在臨床上的應(yīng)用,尤其不適合用于需要通過準(zhǔn)確定量來幫助對(duì)疾病進(jìn)行診斷的體液標(biāo)志蛋白的定量檢測(cè)。因此,尋找更加穩(wěn)定、準(zhǔn)確的血漿蛋白定量檢測(cè)方法一直是國(guó)際上近十年來的研究熱點(diǎn)。
淺談膠乳顆粒增強(qiáng)比濁法在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的作用
膠乳顆粒增強(qiáng)比濁法(particle-enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA)是近年來出現(xiàn)的一種較為穩(wěn)定、準(zhǔn)確的體液蛋白均相免疫比濁檢測(cè)方法。PETIA法大體分為兩種。一種是散射比濁檢測(cè)法;另一種是透射比濁檢測(cè)法。這兩種方法的基本原理非常相似,都是在高分子膠乳微球的表面交聯(lián)單克隆抗體,當(dāng)交聯(lián)有抗體的微球與抗原結(jié)合后,在短時(shí)間內(nèi)會(huì)迅速聚集在一起,改變了反應(yīng)液的散光性能或透光性能。而且,反應(yīng)液散光性能或透光性能(即吸光度)的改變與被測(cè)抗原的濃度有較強(qiáng)的相關(guān)性,在一定范圍內(nèi)可以反映被測(cè)抗原的濃度。PETIA檢測(cè)方法是在均相反應(yīng)體系中進(jìn)行抗原、抗體反應(yīng)及結(jié)果的測(cè)定??乖⒖贵w反應(yīng)后,直接測(cè)定反應(yīng)液的吸光度值,省卻了ELISA法反復(fù)孵育和洗板等煩瑣操作步驟,幾分鐘就能獲得結(jié)果,省時(shí)省力。此外,納米免疫比濁法操作步驟的簡(jiǎn)化也相應(yīng)地避免了許多人為操作因素和試劑、環(huán)境等外界因素的干擾,穩(wěn)定性和重復(fù)性都較好,能較真實(shí)地反映被測(cè)物質(zhì)的含量。免疫比濁法的靈敏度雖然比ELISA法差一些,但足于檢測(cè)到健康人血漿中許多標(biāo)志蛋白的下限值,可完全滿足臨床檢測(cè)要求。
目前,PETIA檢測(cè)試劑所采用的乳膠顆粒多為惰性微球、羧基化微球及氨基化微球。表面修飾的膠乳粒子與抗體的結(jié)合是通過其表面的羧基或氨基與抗體的氨基端共價(jià)結(jié)合,在微球與抗體之間有一個(gè)橋聯(lián)化學(xué)臂,降低了位阻效應(yīng),不僅提高了抗體的結(jié)合率,而且還為抗體提供合適的三維空間立體結(jié)構(gòu),有效地保護(hù)了抗體與抗原結(jié)合的活性區(qū)域。國(guó)外已有多家公司提供納米級(jí)表面修飾的微球粒子原料,并廣泛應(yīng)用于PETIA。這些廠家提供的粒子直徑從20nm-4μm,檢測(cè)的靈敏度得到了極大的改善,檢測(cè)靈敏度最高可達(dá)到1.0ng/ml。可以作為多克隆抗體和單克隆抗體的載體。納米級(jí)粒子的推出解決了對(duì)單克隆抗體結(jié)合的能力不強(qiáng),臨床檢測(cè)的線性范圍窄,干擾因素多,實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性差等問題,大大促進(jìn)了免疫比濁法在臨床上的廣泛應(yīng)用。
采用單克隆抗體交聯(lián)高分子納米微球免疫比濁定量檢測(cè)人體血清蛋白,歸納起來有以下幾個(gè)方面的突出優(yōu)點(diǎn):
(1)操作簡(jiǎn)單,可在幾分鐘內(nèi)快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)血清蛋白含量,真實(shí)反映病情進(jìn)展和評(píng)估治療效果,對(duì)于疾病的早期診斷和治療具有重要的臨床意義;
(2)不易受人為操作和外界因素干擾,檢測(cè)穩(wěn)定性和重復(fù)性都很好;
(3)能利用普通的生化分析儀進(jìn)行檢測(cè),容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化,可在各級(jí)基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)普及和應(yīng)用。