( 三 ) 注核
去核卵母細(xì)胞經(jīng)恢復(fù)就可作為核移植的受體接受核供體移入。按核供體移入部位的不同分兩類,即帶下移植(注射)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)注射。若采用帶下注射,可采用斜口玻璃針(大小時核細(xì)胞大小而定)吸取已分離好的單個供體細(xì)胞,并沿去核時留在透明帶上的切口插進(jìn)去,然后反吸一點(diǎn)細(xì)胞質(zhì),將細(xì)胞連同胞質(zhì)一起注射到卵周隙內(nèi),這樣可使供體細(xì)胞與胞質(zhì)緊密的粘在一起,便于隨后的融合。但在吸取供體細(xì)胞時,要保證細(xì)胞膜的完整,才能使供體細(xì)胞膜與卵母細(xì)胞質(zhì)膜粘合在一起,有利于融合。
( 四 ) 供體細(xì)胞與受體卵母細(xì)胞的融合
帶下注核的卵母細(xì)胞必需對其進(jìn)行融合處理,才能使供核細(xì)胞與受體卵母細(xì)胞形成卵核復(fù)合體。目前,細(xì)胞融合的方法主要有 3 種,即化學(xué)、仙苔病毒和電融合法。電融合法是目前動物核移植的最佳融合方法,因其不僅可使供體細(xì)胞與受體卵母細(xì)胞的質(zhì)膜有效融合,還可以引起卵母細(xì)胞的激活。電融合原理是依靠直流脈沖使細(xì)胞膜產(chǎn)生可逆性的微孔,進(jìn)而導(dǎo)致它們 間的融合。然而,該方法的影響因素較多。首先,待融細(xì)胞間的接觸面與脈沖電場磁力線方向要相互垂直。其次,脈沖強(qiáng)度、時間和融合液種類要相互配套,在一定滲透壓和離子強(qiáng)度的合液中,電脈沖強(qiáng)度與時間不足,膜不能有效穿孔或穿孔面積數(shù)量不夠,不能誘導(dǎo)有效的融;相反,電脈沖強(qiáng)度過大或時間過長,會導(dǎo)致膜的不可逆性擊穿使細(xì)胞崩解。不同的動物種,不同的融合儀器,甚至不同的實(shí)驗(yàn)室條件,融合參數(shù)都有差異。