?基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的，是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)?；蚯贸褪峭ㄟ^同源重組將外源基因定點(diǎn)整合入靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點(diǎn)，以達(dá)到定點(diǎn)修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù)。本文對(duì)三種基因敲除技術(shù)作比較，描述它們的優(yōu)缺點(diǎn)。

基于胚胎干細(xì)胞的同源重組技術(shù)

1、優(yōu)勢(shì)：成熟、可靠、精細(xì)是目前為止唯一一個(gè)可以滿足所有要求的打靶技術(shù)

2、局限性：

A 需要ES細(xì)胞，目前只有小鼠有高效的ES細(xì)胞，其它模式動(dòng)物的ESC還不能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用。

B 周期長、工作量大、費(fèi)用相對(duì)比較高

3、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除模式小鼠

B 條件性基因敲除模式小鼠

C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠

D 基因敲入模式小鼠

E ROSA位點(diǎn)定點(diǎn)轉(zhuǎn)基因
 

TALEN技術(shù)

1、優(yōu)勢(shì)：基因敲除效率高，速度快，可實(shí)現(xiàn)多物種基因敲除

2、局限性：

基因敲入效率較低，多基因敲除困難，系統(tǒng)構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜，存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)

3、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除大/小鼠

B 全基因敲除細(xì)胞系
 

EGE系統(tǒng)

1、優(yōu)勢(shì)：基因敲除/敲入效率高，速度快，可實(shí)現(xiàn)多基因、多物種基因敲除/敲入，系統(tǒng)構(gòu)建簡單

2、局限性：

存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)，但通過選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率，In vivo脫靶可通過傳代去除.

3、可提供服務(wù)類型：

A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠

B 全基因/條件性報(bào)告基因敲除/敲入大/小鼠

C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建

D 細(xì)胞系敲除/敲入