4. 微分干涉和極性顯微鏡去核法
對(duì)于一些脂肪顆粒含量較少的卵母細(xì)胞(如兔和小鼠等),在微分干涉相差顯微鏡下觀察到染色體,因此對(duì)于這類卵母細(xì)胞可直接在微分干涉相差顯微鏡下去核(kono et al,1991)。然而,對(duì)于脂肪顆粒含量較多的卵母細(xì)胞(如豬),在微分干涉相差顯微鏡下則看不到染色體。
最近,美國(guó)在極性光學(xué)顯微鏡的基礎(chǔ)上研制出一種紡錘體圖像觀察系統(tǒng) (spindle view),在這種顯微鏡下,可直接觀察到卵母細(xì)胞的紡錘體 , 從而可準(zhǔn)確地對(duì)卵母細(xì)胞去核。目前,這種去核方法已越來(lái)越多地被許多實(shí)驗(yàn)室采用。
5. 離心去核法
離心去核的原理是根據(jù)細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的密度不同,細(xì)胞核的密度大于細(xì)胞質(zhì),用離心方法可使沒(méi)有透明帶自的卵母細(xì)胞核被甩向一側(cè)而最后脫離卵母細(xì)胞。Yang等(1989)利用離心法成功地去除了沒(méi)有透明帶的倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞核。然而,由于該方法必需去掉透明帶,不利于隨后的胚胎發(fā)育,如果同樣能應(yīng)用于透明帶完整的卵母細(xì)胞,那么這種方法會(huì)成為一種有效的去核方法。
6. 化學(xué)試劑去核法
用 Etoposkle 和放射菌酮處理處于第一次減數(shù)分裂中期的小鼠卵母細(xì)胞,處理后的染色體相互緊密結(jié)合,不易分開(kāi)，形成染色體復(fù)合體,在卵母細(xì)胞排出極體時(shí),染色體復(fù)合體隨極件起排出,這樣可使卵母細(xì)胞去核成功率達(dá)90%。
以上幾種去核方法的前4 種比較常用。