細胞培養(yǎng)質(zhì)量的好壞，直接關系到實驗進行得順利與否。無數(shù)童鞋都經(jīng)歷過因為細胞污染而影響實驗進度的問題，被老板批評是小事，要是影響到按時畢業(yè)可就粗大事了。

下面，醫(yī)學服務團隊討論一下細胞培養(yǎng)常見污染的識別及處理。

1、細菌：

識別：細菌在顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，有球形，鏈形，桿形等。大家不必深究。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃，培養(yǎng)瓶頂部有一層細沙一樣的東西。就知道大事不好啦。見下圖。

處理：可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理。可以用四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL；鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。其實，毛毛蟲說句實話，一旦發(fā)生污染，就已經(jīng)大勢已去了。如果細胞不是特別特別珍貴的話，還是趁早扔了，重起爐灶吧。

所以，最重要的還是防范于未然。做好培養(yǎng)間，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作。在操作的時候，嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范。

2、霉菌：

識別：因為培養(yǎng)液是清亮的，所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn)，等發(fā)現(xiàn)時往往已經(jīng)為時過晚了。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，如同風中柳絮。細胞仍可生長，但時間一長，細胞的狀態(tài)就變差。見下圖。

處理：細胞一旦被霉菌污染，很難挽救，兩性霉素B或制霉菌素都于事無補，建議果斷舍棄該污染細胞，將環(huán)境徹底消毒。

采用酒精徹底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。

3、支原體：

識別：多為多邊形，培養(yǎng)液一般會變渾濁。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是和你一起慢慢變老。支原體污染后，可影響所有的細胞生長參數(shù)。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結(jié)果之數(shù)據(jù)方有意義。

處理：沒有什么好處理的。直接扔了吧。污染到其他的細胞就虧大發(fā)了。還是那句話，預防為主。

4、黑蛟蟲：

識別：誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西。據(jù)說是納米級的細菌。低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去。培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響。但是如果太多了，也會影響細胞生長和實驗結(jié)果。

處理：因為根本不知道這是什么物種，所以也談不上什么處理方式。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。

5、真菌：

識別：真菌污染和霉菌污染差不多。一般培養(yǎng)液清亮，所以很難早期發(fā)現(xiàn)。鏡下有時候象絲狀，有時候象珊瑚狀。慢慢地會長出很細的黑色絲狀物。這個時候，已經(jīng)晚了，細胞很難救活了。

處理：同霉菌污染一樣，沒有什么好處理的，直接扔了吧。然后徹底消毒滅菌培養(yǎng)間，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液。亡羊補牢吧。

綜上所述，兩個原則：預防為主，果斷扔掉。如果細胞實在特別特別特別珍貴。那就只好死馬當活馬醫(yī)了。用廣譜抗生素5倍推薦濃度沖擊一下。當然細胞狀態(tài)差的話不一定熬得住。同時增加傳代時的細胞的密度，培養(yǎng)基中的血清濃度，勤換液。也可以不加抗生素進行單克隆有限稀釋至96孔板，再克隆化。