你的細(xì)胞污染了？別哭的稀里嘩啦！擦干眼淚好好看看本文的歸納總結(jié)吧！

　　細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種，分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染。

細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下

細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。

支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，原體感染，國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

黑膠蟲(chóng)：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無(wú)明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無(wú)明顯變化，可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類(lèi)似現(xiàn)象。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無(wú)須特殊處理。

真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。

原蟲(chóng)：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)，最終形成惡性循環(huán)。

病毒：組織細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，如果沒(méi)有除去潛在的病毒，就會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

非同種細(xì)胞污染 ：即是細(xì)胞交叉污染，由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi)，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。目前，世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。

細(xì)胞培養(yǎng)中疑似污染的案例

　　洋蔥佰克霍爾德菌（Burkholderiacepacia）原屬假單胞菌屬，是植物病原菌，因引起洋蔥患病而得名，是醫(yī)院感染病原菌之一。

　　洋蔥伯克霍爾德菌是一種廣泛存在于土壤及水中，與醫(yī)院感染密切相關(guān)的革蘭陰性桿菌，尤其為免疫缺陷及肺囊性纖維化患者易感染細(xì)菌之一。它可以在無(wú)糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。在醫(yī)院環(huán)境中?？晌廴咀詠?lái)水、體溫表、噴霧器、靜脈導(dǎo)管、導(dǎo)尿管、靜脈輸液管等，造成院內(nèi)傳播，導(dǎo)致多種醫(yī)院感染，如敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎、傷口感染、深部膿腫和眼結(jié)膜炎等，尤其采用導(dǎo)管植入進(jìn)行治療者，更容易引起感染。洋蔥伯克霍爾德菌對(duì)多種抗菌藥具有天然的耐藥性。耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，治療可選擇復(fù)方磺胺甲繟唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和頭孢他啶等抗菌藥物。

　　霉菌污染，確切的說(shuō)應(yīng)該屬于絲霉，因?yàn)槟憧梢钥吹矫黠@的菌絲，有些種類(lèi)是無(wú)橫隔的，有的是具橫隔的，培養(yǎng)基呈淡紫色，或不變色，但會(huì)變得粘稠。

　　污染來(lái)源：一般是來(lái)自實(shí)驗(yàn)服，并且具有季節(jié)性，像現(xiàn)在這種長(zhǎng)蘑菇的季節(jié)很容易污染這種菌類(lèi)。

　　細(xì)菌污染，你在倒置顯微鏡下無(wú)法看到細(xì)菌的結(jié)構(gòu)（需油鏡），污染晚期培養(yǎng)基呈黃色。

　　螨蟲(chóng)污染。這個(gè)是原代培養(yǎng)皮膚成纖維細(xì)胞時(shí)污染的，形態(tài)呈桿狀，能自主直線游動(dòng)，速度相當(dāng)快。。污染源：小鼠毛發(fā)中。。。

　　酵母污染，鏡下能隱約看到出芽生殖，不過(guò)不知道酵母會(huì)不會(huì)呈團(tuán)聚集在一起，因?yàn)檎掌心菆F(tuán)黃色的東西也是此污染物，肉眼觀察使可看到明顯的白色或淡黃色顆粒狀的漂浮物，同樣這個(gè)污染源也是小鼠的皮膚

污染的清除

　　培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之;在尋找原因后徹底消毒操作室，復(fù)蘇或重新購(gòu)置細(xì)胞，再培養(yǎng)。

　　若污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。

　　一、細(xì)菌和真菌的清除

　　使用抗生素

　　抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。

　　二、支原體的清除

　　1、用MRA處理

　　用MRA(Mycoplasma Removal Agent)處理細(xì)胞，每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細(xì)胞純潔健康，效果好。

　　2、用清洗純化法清除支原體污染的方法

　　細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌

　　其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過(guò)反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至極限。

　　如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達(dá)到更好的效果。

　　3、藥物輔助加溫處理

　　先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。

　　4、使用支原體特異性血清

　　用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。

污染的預(yù)防

　　預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染的最好辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。

　　一般預(yù)防可從以下幾方面著手：

　　1、添加抗生素

　　2、從物品、用品消毒滅菌著手

　　細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌試驗(yàn)陰性后才能使用。

　　操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔消毒滅菌。

　　3、從操作者做起

　　(1)進(jìn)無(wú)菌室前要用肥皂洗手，按規(guī)定穿隔離衣。工作開(kāi)始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

　　(2)操作者動(dòng)作要輕，必須在火焰周?chē)鸁o(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。

　　(3)操作時(shí)要常更換吸管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。

　　4、防止細(xì)胞交叉污染

　　在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分。

　　在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。

　　細(xì)胞一旦購(gòu)置或從別處引入，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng)。

　　5、無(wú)菌室的徹底消毒

　　1) 0.1%新潔爾滅全面徹底擦洗無(wú)菌室;

　　2)甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣休對(duì)各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。