一、細(xì)胞復(fù)蘇的原則

在實(shí)際操作中，凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

二、所需材料

· 含有細(xì)胞的凍存管

· 37℃水浴鍋

·  37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)基

三、細(xì)胞的復(fù)蘇流程

1．佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出冷凍管。

2．迅速放入37℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其完全融化，然后在無菌下取出細(xì)胞。

3．在150g速度下離心5～10分鐘，棄去上層液

4．加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109 cell/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)

5．次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。

6．若細(xì)胞密度較高，及時傳代。

四、注意事項(xiàng)

在細(xì)胞復(fù)蘇操作時，應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高，生長及形態(tài)良好。