干細(xì)胞在體內(nèi)存在的量很少，處在一個個環(huán)境相對穩(wěn)定的“niche”中，所以一旦完成分離進(jìn)入體外環(huán)境，最重要的就是保證細(xì)胞的活力不受影響，那么就必須提供一個相對穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境。這些環(huán)境就是靠培養(yǎng)基和培養(yǎng)箱來提供了。

而培養(yǎng)液中最重要的莫過----血清，特別是對干細(xì)胞來說。所以為了最優(yōu)的干細(xì)胞培養(yǎng)效果，推薦選用對應(yīng)的干細(xì)胞專用血清。牛血清是最常用的，但是根據(jù)血清的來源不同又可以分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。

胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24 小時之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30 天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分最少，所以也成為了干細(xì)胞培養(yǎng)的首選。

那么培養(yǎng)中如何正確的使用血清？避免不好的影響呢？

（1）血清的濃度

對大部分的干細(xì)胞，最佳的血清濃度是10%。過高的血清濃度會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)分化的現(xiàn)象，如果是需要高濃度的血清，培養(yǎng)的時間也不能超過兩周，否則會導(dǎo)致細(xì)胞分化能力下降。過低的血清會導(dǎo)致細(xì)胞的增殖速度下降。

（2）血清的溶解

必須在 4℃進(jìn)行，最好過夜溶解。這樣可以減少沉淀的產(chǎn)生，避免營養(yǎng)物質(zhì)的流式。同時也要避免血清的過濾，如果需要過濾可以和培養(yǎng)基一起過濾。

（3）血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度

血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長，而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細(xì)胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì)。注意以下幾點(diǎn)：

（1）需要長期保存的血清必須儲存于-20℃或-80℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1 個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10％，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。  

（2）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20 ℃或 -80 ℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20 ℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。影響使用效果！  

（3）熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分（complement ）滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃斐裳宄恋砦镲@著增多，而且還會影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用,  促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

（4）切勿將血清在 37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質(zhì)量。  

（4）血清中的沉淀物絮狀物

主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量?？捎秒x心3000rpm, 5 分鐘去除，也可不用處理。顯微鏡下“小黑點(diǎn)”：經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點(diǎn)”，常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下，此小黑點(diǎn)不會影響細(xì)胞生長。