一、實驗方法

1．用6孔板培養(yǎng)細胞，待細胞生長達到60%-70%，根據(jù)實驗需求處理，繼續(xù)培養(yǎng)；

2．根據(jù)實驗細胞處理后，把細胞吸出至1.5ml離心管內(nèi)，200g 離心5min；

3．用 PBS 洗滌細胞2次，200g離心5min，收集1-5×105 細胞；

4．細胞固定：加入1ml冰浴預冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃固定2h或更長時間。固定12-24 h可能效果更佳。200g左右離心3-5min，沉淀細胞。加入約1ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。 注意：70%乙醇在使用前需進行預冷處理

5．碘化丙啶染色液的配制：參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：

6．染色：每管細胞樣品中加入0.5 ml碘化丙啶染色液，緩慢并充分重懸細胞沉淀，37℃避光溫浴30min。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24h內(nèi)完成流式檢測。

7．流式檢測：用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。

二、結(jié)果示例及分析

圖片解析：

①G1期(gap1)，指從有絲分裂完成到期DNA復制之前的間隙時間；

②G2期(gap2)，指DNA復制完成到有絲分裂開始之前的一段時間；

③S期(synthesis phase)，指DNA復制的時期。

圖中第一個峰為G1期，第二個峰為S期，第三個峰為G2期