一、實(shí)驗(yàn)方法

1．用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60%-70%，棄掉舊培養(yǎng)基。收集對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基到一離心管內(nèi)備用。

2．用0.25%胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞變圓，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)基，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞，收集到離心管內(nèi)（注意：懸浮細(xì)胞不需要胰酶消化，直接收集到離心管即可）。

3．200g離心5min，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。

4．小心吸去上清，可以殘留約50μl的培養(yǎng)基。

5．加入約1ml預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸去上清，可以殘留約50μl PBS。

6．輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

7．在每個(gè)流式檢測(cè)管或板式微孔中加入50μl的稀釋后的抗體（抗體用Staining Buffer稀釋成合適的濃度）；在空白管/孔或同型對(duì)照管/孔中加入50μl Staining Buffer。若進(jìn)行抗體最佳濃度測(cè)試，建議范圍2-0.03μg/106細(xì)胞。

8．在各管/孔中分別加入50μl細(xì)胞懸液（約106細(xì)胞），并輕輕混勻。

9．避光冰浴或在4℃冰箱中孵育20min。孵育完成后，加入Staining Buffer（每流式檢測(cè)管中加2ml，而每微孔中加200μl）。

10．200g 4℃離心5min，并棄去上清，重復(fù)洗滌過(guò)程3次。100μl PBS重懸細(xì)胞后上流式儀檢測(cè)。

二、結(jié)果示例及分析

如上圖中，

左上象限Q1代表CD44標(biāo)記的細(xì)胞

右上象限Q2代表CD34和CD44共同標(biāo)記上的細(xì)胞

右下象限Q3為CD34標(biāo)記的細(xì)胞

左下象限Q4為未被標(biāo)記的細(xì)胞。